Doug (Jack Black) en Griff (Paul Rudd) zijn al sinds hun jeugd beste vrienden en hebben er altijd van gedroomd om ooit een remake te maken van hun favoriete film: de ‘klassieker’ Anaconda. Aangedreven door een midlifecrisis besluiten ze om hun droom eindelijk waar te maken en trekken ze diep het Amazonegebied in om te gaan filmen. Maar als ze daar op een echte reuzenanaconda stuiten, verandert de komische chaos van hun filmset in een levensgevaarlijke situatie. De film van hun leven zou ze zomaar het leven kunnen kosten…